應(yīng)廣大用戶朋友的需求，我們將陸續(xù)推出《藥品微生物檢驗(yàn)問答集錦》系列，本文章為系列第三篇。本系列所列出的問題均是藥品微生物檢驗(yàn)過程中提問頻次較高的問題，我們咨詢專家老師后匯編，希望可以幫助藥品微生物檢驗(yàn)從業(yè)人員對(duì)檢驗(yàn)過程中遇到的問題有新的理解。大家對(duì)感興趣的、比較關(guān)注的問題，也可以留言，我們一起交流探討！

1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)后如果有霧狀或者絮狀物質(zhì)出現(xiàn)但不能確定是否是微生物生長，需要如何判斷？

  參照《中國藥典2015版1101無菌檢查法》，如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁，或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

2.只用做無菌檢查用的FTM和TSB的培養(yǎng)基適用性檢查是否可以不用對(duì)照培養(yǎng)基？

  嚴(yán)格按照藥典來說，可以選擇不用。但是既然有對(duì)應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基，建議選擇參比用于培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。

3.在瓊脂培養(yǎng)基制備過程中，發(fā)現(xiàn)滅菌后的培養(yǎng)基制成的平板部分偏軟甚至有不凝固的現(xiàn)象，是什么原因？

  主要是瓊脂分布不均導(dǎo)致的。建議瓊脂類培養(yǎng)基滅菌前加熱溶解均勻（如果是大體積配制進(jìn)行分裝滅菌的培養(yǎng)基，建議煮沸溶解，攪拌分裝）；滅菌后，使用前，關(guān)注培養(yǎng)基的透光性是否均一，如果不均一，輕輕搖晃使其均勻，再傾注平皿使用。

4.平板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后，平板干裂，縮水是什么原因？如何避免？
  平皿干裂縮水，與瓊脂的保水性、傾注培養(yǎng)基的量、平皿的透氣性、培養(yǎng)箱條件等因素均有關(guān)系。
  a.瓊脂：不同的瓊脂在保水性方面略有差異，保水性差的瓊脂可能會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重縮水或者干裂。
  b.培養(yǎng)基的量：傾注的培養(yǎng)基越少，平板越薄越容易干裂。按照GB4789要求，傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3 mm（直徑90 mm的平皿，通常要加入18 mL～20 mL瓊脂培養(yǎng)基）。如果平板需儲(chǔ)存，或者培養(yǎng)時(shí)間超過48 h或培養(yǎng)溫度高于40 ℃，則需要傾注更多的培養(yǎng)基。
  c.平皿的透氣性：平板的密封性越好，保存和培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基失水越少。雖然增加平板的密封性可以減少水份流失，但并非密封性越高越好，一些需氧型微生物（如銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌等），在密閉環(huán)境中生長較差，需要良好的透氣性才能較好的生長。
  d. 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)箱是影響平皿干裂問題的關(guān)鍵因素之一。大型的培養(yǎng)箱為了保證內(nèi)部溫度均一，通常帶有較強(qiáng)的鼓風(fēng)系統(tǒng)，內(nèi)部有較強(qiáng)的空氣流動(dòng)。而氣流越強(qiáng)，則越容易導(dǎo)致平皿失水。而對(duì)于一些沒有鼓風(fēng)系統(tǒng)的小型培養(yǎng)箱，則很少會(huì)出現(xiàn)平皿干裂現(xiàn)象。在培養(yǎng)箱內(nèi)擺放平皿時(shí)，應(yīng)盡量避開風(fēng)口氣流大的位置，同時(shí)遠(yuǎn)離培養(yǎng)箱內(nèi)部發(fā)熱板。
  綜上所述，在遇到平板干裂縮水問題時(shí)，可通過增加平板培養(yǎng)基厚度、培養(yǎng)箱內(nèi)增加擋板降低氣流或避開風(fēng)口、選擇合適透氣性的平皿、選擇適宜瓊脂的的培養(yǎng)基等進(jìn)行綜合的考慮分析，制定對(duì)應(yīng)的方案和措施。

5.滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基，是否可以在恒溫箱或者恒溫水浴鍋過夜或更長時(shí)間存放？對(duì)培養(yǎng)基性能會(huì)有影響嗎？

  《GB4789.28 -2013培養(yǎng)基的試劑和質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)中指出，融化后的培養(yǎng)基放入47～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據(jù)實(shí)際培養(yǎng)基凝固溫度適當(dāng)提高水浴鍋溫度)，直至使用，培養(yǎng)基達(dá)到47℃～50℃的時(shí)間與培養(yǎng)基的品種、體積、數(shù)量有關(guān)。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時(shí)間一般不應(yīng)超過4 h。
  《中國藥典2015版 9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》中指出融化的固體培養(yǎng)基應(yīng)置于45～50℃的環(huán)境中，不得超過8小時(shí)。
  長時(shí)間的保溫可能會(huì)造成培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分流失，靈敏度下降，培養(yǎng)效果變差，瓊脂的凝膠強(qiáng)度降低等情況，保溫過夜或更長時(shí)間這種操作方法不是很規(guī)范。一般建議在滿足試驗(yàn)安排的情況下，恒溫存放的時(shí)間越短越好。

6.滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基若未用完，可以下次再重新融化繼續(xù)使用嗎？

  《GB4789.28 -2013培養(yǎng)基的試劑和質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)中指出，含有活性化學(xué)物質(zhì)或不穩(wěn)定性成分的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化；因此對(duì)于一些已添加抗生素、卵黃、血清等不穩(wěn)定成分的培養(yǎng)基，不可以再次融化使用。而對(duì)于一般的培養(yǎng)基（未開封啟用），可使用沸水浴或采用有相同效果的方法使培養(yǎng)基融化，再次融化后未用完的培養(yǎng)基則不能重新凝固留待下次使用。

原文鏈接：交流分享II藥品微生物檢驗(yàn)常見問題問答集錦（三）。